产品概述
非洲猪瘟病毒 PCR MIX（荧光探针法冻干型）
说明书
【 名称】
通用名 非洲猪瘟病毒（ASFV） 荧光探针法 PCR 检测试剂
商品名无
英文名 African Swine Fever Virus Real - time PCR Test Kit
汉语拼音 Feizhouzhuwenbingdu Yingguang PCR Jiance Shijihe
【 主要成分与含量】
| 组份名称 | 单位及数量 | 主要成分 |
| 8 管 PCR 条带 PCR 混合物 (冻干微球) | 6 条 | 非洲猪瘟病毒（ASFV） 基因特异性引物和探针、 猪内标基因特异性引 物和探针、 外标引物探针， Taq DNA 聚合酶、 dNTP、 缓冲液、 Mg2+ |
| 阳性质控品 (PC) | 2 支 | 质粒， 携带非洲猪瘟病毒（ASFV） 受体和猪内标基因的靶片段 |
| 外源性质控品 | 2 支 | 外源性质粒 |
【 作用与用途】 用于全血、 血清、 血浆、 淋巴结、 脾脏、 肾脏、 扁桃体和肌肉、 环境、 饲料等样品中的非洲猪瘟病毒核酸的检测。
【 需要自备的器材】
1． 试剂： 核酸提取试剂。
2． 仪器： 离心机、 荧光 PCR 扩增仪、 可调移液器（20µL、 200µL） 。
3． 耗材： 吸头（20µL、 200µL） 。
【 样品采集】 病死或扑杀猪， 取脾脏、 淋巴结、 肾脏、 扁桃 体、 肺、 肌肉等； 待检活猪， 用注射器取血 5 mL； 或采集与病猪相关场所的粪便、 饲料、 污水等环境 样品。 2～8 ℃保存， 送实验室检测。 （要求送检病料 新鲜， 严禁反复冻融。 ）
【 测试步骤】
首次使用试剂盒时， 将阳性对照微球溶解在 0.2 ml 无核酸酶水中， 作为阳性对照溶液， 等分并储存在
-25° C ~-15° C 下。
1.检测准备
1) 样本处理： 按照相关标准对样本进行核酸提取。
2) 取待检测样本数量的微球反应管加 2 管（阴、 阳性对照） ， 并在各自的试管中添加以下内容:
阳性对照(1 管): 加入 20μ l 阳性对照溶液
NTC (1 管):加入 20μ l 无核酸酶的水
待测样本: 加入 20μ l 纯化的病毒核酸洗脱液， 不足 18ul 样本的需加入无核酸酶的水补足 18ul 体积；
3) 关闭试管盖， 充分混匀并离心。
2.PCR 扩增
1) 将 PCR 反应管放入实时荧光 PCR 仪中进行 PCR 扩增反应。
2) PCR 扩增程序（根据不同仪器可进行调整） ：
| 步骤 | 温度 | 时间 | 周期数 |
| 预变性 | 95℃ | 3 分钟 | 1 |
| 变性 | 95℃ | 10 秒 | 40-50 |
| 退火、 延申、 荧光检测 | 60℃ | 30 秒 |
荧光检测通道:FAM（靶标） 、 外标（VIC） 、 CY5（内标） 。 如使用 ABI 7500，
应将“被动参考染料” 选项设置为“无” 。
3)记录每个荧光通道的 Ct 值。
3.测试结果的解释
1） 质量控制:
阳性和阴性对照的预期 Ct 值:
| 质控组 | Fam 通道 | VIC 通道 | CY5 通道 |
| 阳性对照 | ≤ 25 | ≤28 | ≤30 |
| NTC | - | ＞37 | >37 |
| “ -” : 检测不到 Ct 值 |
以上要求需要在同一实验中满足， 否则运行视为无效。
2） 结果判定
1 试验成立条件
阳性对照 Ct 值应≤25 且出现特异性扩增曲线， 阴性对照应无 Ct 值或 Ct 值≥40， 且无特异性扩增曲
线， 试验结果有效； 否则应重新进行试验。
2 结果判定
样品 Ct 值≤37 且出现特异性扩增曲线， 判为阳性； 无 Ct 值且无特异性扩增曲线， 判为阴性； 当 37
＜Ct 值＜40 时判为可疑， 应重新提取样品核酸进行检测， 若 Ct 值仍＜40,则判为阳性， 若无 Ct 值且无特
异性扩增曲线， 判为阴性。
4.性能特性
1） 检测下限 (LLOD) : 200 个病毒基因组 DNA/ ml.
2） 精密度: 检测高、 低浓度精密度的参比样品连续重复 10 次， 其 Ct 值的变异系数≤5%。
3） 敏感性和特异性
| PCR 试验阳性 | PCR 试验阴性 | 小计 | |
| 临床参考阳性 | 115 | 0 | 115 |
| 临床参考阴性 | 0 | 144 | 144 |
| 小计 | 115 | 144 | |
| 灵敏性 | 特异性 | ||
| 100% | 100% |
【 注意事项】
（ 1） 使用本试剂盒的实验室应严格按照国家有关规定进行管理。
（ 2） PCR 冻干试剂对湿度敏感， 容易吸潮， 使用时应做好所有准备工作后， 再撕开包装铝箔袋， 若 pcr
管未全部用完， 需冷存， 再次使用时需在使用环境下回温再打开管盖加样。
（ 3） 扩增试剂准备时应按阴性对照、 待检核酸、 阳性对照的顺序加入 PCR 反应管中。
（ 4） 加样结束后应盖紧管盖， 以免液体蒸发。
（ 5） 处理样品用器械及废弃物品应高压灭菌。 检测过程中使用过的吸头， 应直接打到盛有
10% 84 消毒液的带盖废物缸内。 检测结束的 PCR 反应管， 严禁开盖不得高压处理。
（ 6） 工作台及各种实验用品应定期清洁并用 10% 84 消毒液或紫外灯进行防污染处理。
（ 7） 各区域物品均为专用， 不得交叉使用， 以免污染。 检测结束后， 应立即对工作台进行清洁。
（ 8） 严禁使用超过有效期限的试剂； 不同批号的试剂请勿混用。
【 规格】 （ 1） 48 检份/盒 （ 2） 96 检份/盒
【 贮藏与有效期】 30 度以下保存， 有效期 24 个月。
【 生产厂家】
产品特点
产品视频
实验结果
技术参数
经典案例
说明书参考文献
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