产品概述
Qubit® dsDNA HS Assay Kits操作说明书
【产品名称】
通用名称：双链DNA超敏检测试剂盒（荧光法）
英文名称：Qubit® dsDNA HS Assay Kits
【包装规格】
100 份&500 份/盒
【预期用途】
Nanodrop系列微量分光光度计采用目前最常见的紫外吸光法对待测样品的浓度及纯度进行检测，由于它会检测吸光度在260nm处所有物质的吸光值（如DNA、RNA、降解核酸和游离核苷酸等其他杂质），因此读数并不是十分准确。而荧光计通过荧光染料与特定目标分子结合后，检测其荧光强度来测目标分子的浓度，因此其定量结果一般低于A260nm处的读数，但是更为准确。
另外，准确的DNA定量对于许多后续应用而言都至关重要。 Nanodrop系列全波长微量分光光度计无法精确测定5ng/ul以下的DNA浓度，然而，许多DNA样品又恰在这个范围之内。在检测双链DNA时，荧光计的检测极限可达0.5pg/ul。此时，更为灵敏的荧光计似乎是个更好的选择。 荧光计和相应的定量试剂盒，能快速灵敏、精确测定DNA的浓度。
本试剂将被用于成本昂贵的下游实验:qPCR 、PCR克隆、转染和新一代测序等精密测定的实验，精准定量范围10 pg /µL至100ng/µL。
【检验原理】
本试剂盒利用Picogreen DNA染料能够特异性结合双链DNA，而不与蛋白质、RNA、盐离子结合的原理，通过激发光照射，Qubit检测仪收集发射光，特异的分析样品中双链DNA的实际含量，能够排除样品中蛋白质、RNA、盐离子等物质的干扰，从而对双链DNA进行精准的定量。
【主要组成成份】
| 试剂盒组成 | 保存 | Q2401（100人份） | Q2402（500人份） |
| Qubit Reagent | 2-8℃ | 100 μL/支×1支 | 500 μL/支×1支 |
| Qubit dsDNA HS Standard #1 | 2-8℃ | 1mL/瓶×1支 | 5mL/瓶×1瓶 |
| Qubit dsDNA HS Standard #2 | 2-8℃ | 1mL/瓶×1支 | 5mL/瓶×1瓶 |
| Qubit dsDNA HS Buffer | 2-8℃ | 30mL /瓶×1瓶 | 120mL /瓶×1瓶 |
| 说明书 | 常温 | 1份 | 1份 |
备注：
① 不同批次的试剂不可混合使用。
【储存条件及有效期】
2-8℃保存；避免反复冻融；长期储存请放-20℃，有效期24个月。
【适用仪器】
荧光仪（Qubit 2.0 ，Qubit 3.0等荧光仪）
【需要但试剂盒没有提供】
一次性无尘手套、 Qubit® assay tubes (500 tubes, Life Technologies, Cat. no. Q32856)或者Axygen® PCR-05-C tubes （VWR, part no. 10011-830）
【检验方法】
1. 实验准备：
1.1 准备好检测所需要的0.5ml的薄壁离心管（n=待测样品数+2 standards）；
1.2 在薄壁离心管的管盖处进行标记样品的编号，切不可在管的侧壁进行标记。
1.3 Qubit® 工作液的准备：使用新的塑料管按照使用的量将Qubit® Reagent用Qubit® dsDNA HS Buffer按照1:200的比例进行稀释，例如：V（Qubit® 工作液）=（待测样品数+2 standards）×（1V（Qubit®Reagent）+199V（Qubit® dsDNA HS Buffer））涡旋混匀待用；
1.4 按190μL将Qubit® 工作液分到标准品的2个离心管中，分别加入10μL标准品Qubit dsDNA HS Standard #1和Qubit dsDNA HS Standard #2，涡旋混匀备用，注意不要出现气泡；
1.5 待测样品：根据实际需要的量，将Qubit® 工作液进行分装，确保测量体积为200μL。例如：若待测样品的体积为5μL，则Qubit® 工作液为195μL进行分装。
1.6 将待测样品加入对应的检测管中，确保终体积为200μL；涡旋混匀，不要出现气泡。
1.7 将准备好的标准品和样品放置室温反应3min，待测。
操作流程图例：
2. Qubit® 3.0操作步骤
2.1 在Qubit® 3.0主屏幕操作页面，选择DNA，然后选择检测类型dsDNA High Sensitivity。显示“Read standards”，选择Read Standards进行检测。
2.2 将装有Standard #1管子插入样品槽中，关闭上盖， 按键 Read standard. 读取完成后(~3 seconds)， 移走Standard #1。
2.3将 装有Standard #2管子插入样品槽中，关闭上盖， 按键 Read standard. 读取完成后(~3 seconds)， 移走Standard #2。
2.4 按键Run samples。
2.5 在读取页面，选择相应的单位和体积；
2.5.1 从旋转轮面板上选择+或-按钮来选择添加到试管中的样品体积（从1 - 20μl）；
2.5.2 从下拉菜单中选择测量样品浓度的浓度单位。
2.6 将装有待测样品的管子插入样品槽中，关闭上盖， 按键 Read ，读取完成后(~3 seconds), 移走样品，直至样品测完。
3. Qubit® 2.0操作步骤
3.1 在Qubit® 2.0主屏幕操作页面，选择DNA，然后选择检测类型dsDNA High Sensitivity。显示“Read standards”，选择Read Standards进行检测。
3.2 将装有Standard #1的管子插入样品槽中，关闭上盖， 按键 Read standard. 读取完成后(~3 seconds)， 移走Standard #1。
3.3 将 装有Standard #2管子插入样品槽中，关闭上盖， 按键 Read standard. 读取完成后(~3 seconds)， 移走Standard #2。
3.4 按键Run samples。
3.5 将装有待测样品的管子插入样品槽中，关闭上盖， 按键 Read ，读取完成后(~3 seconds), 移走样品，直至样品测完。
3.6 按照下面公式计算样品管中DNA的浓度。
样品浓度 = QF value ×（ QF Value :Qubit® 2.0直接测量得到样品的结果；X:加入的样品的体积）
【产品性能指标】
1. 最低检测限：10pg/μL
2. 核酸定量检测线性范围10pg/μL-10ng/μL。
3. 特异性检测与Mg2+、氯化钠、醋酸钠、醋酸铵、乙醇、苯酚、氯仿、SDS、RNA、蛋白质、Triton-X100、dNTPS、BSA等干扰物没有交叉反应。
【注意事项】
检测温度：所有检测必须在室温操作（ (22–28˚C)）；
孵育时间：DNA与工作液混合后，反应3min，荧光信号在3个小时内都是稳定的。
荧光校准：每次使用前，请按照批次使用校准，以确保实时检测数据的一致性。
95%的客户使用过程中发现，使用体积为1μl的样品检测，误差偏差较大，不推荐体积＜2μl的检测。
室内若开空调的情况下，请远离空调的出风口检测，避免温度不稳定导致检测样品浓度的误差。
产品特点
产品视频
实验结果
技术参数
经典案例
说明书参考文献
相关产品
——
在线留言
——
*注：请务必信息填写准确，并保持通讯畅通，我们会尽快与你取得联系
